苗木组织培养中各种用于接种培养的材料 称为外植体。包括苗木体的各种器官、组织、细 胞和原生质体等。组织培养所用的材料非常广 泛，可采取根、茎、叶、花、芽和种子的子叶，有时 也利用花粉粒和花药，其中根尖不易灭菌，一般 很少采用。
对于木本花卉来说，阔叶树可在一二年生的
枝条上采集，针叶树种多采种子内的子叶或胚
轴.草本苗木多采集茎尖。
在快速繁殖中，最常用的培养材料是茎尖， 通常切块在0. 5 001左右，如果为培养无病毒苗 而采用的培养材料通常仅取茎尖的分生组织部 分，其长度在0.111皿以下。
培养材料的灭菌
取来的材料虽经选择，外部总还有不少杂 菌，因此,接种前应进行表面灭菌。
①先将材料用流水冲洗干净，最后一遍用 蒸馏水冲洗，再用无菌纱布或吸水纸将材料上的 水分吸干，并用消毒刀片切成小块。
②在无菌环境中将材料放人70《酒精中浸 泡30〜60 So
③再将材料移人漂白粉的饱和液或0.01% 升汞水中消莓5〜10 min.
④取出后用无菌水冲洗三四次。
将已灭菡的材料，用无菌刀、剪、镊等，在无
菌的环境下，剥去芽的鳞片、嫩枝的外皮和种皮 胚乳等，叶片则不需剥皮。然后切成0.2〜
5 0巾厚的小片，这就是外植体。在操作中严 禁用手触动材料。
4. 4. 2 接种
接种是指把经过表面灭菌后的苗木材料切 碎或分离出器官、组织、细胞，转放到无菌培养 基上的全部操作过程。整个过程均须无菌 操作。
①接种前先把接种室紫外灯打开，照射灭 菌20〜30 !^⑴或提前0. 5〜1 d用髙锰酸钾和 甲醛混合液熏蒸。接种台要提前开启。
②操作人员进人接种室前需用肥皂水洗手 灭菌，换上经过消毒灭菌的白色工作服和拖鞋， 戴上工作帽和口罩。
③进人接种室后用70《的酒精棉球擦拭双 手、超净工作台和需放上工作.台的所有器具，防 止交叉污染。‘
④点燃酒精灯，将接种钩、剪刀、镊子放人 不锈钢盘或瓷盘内烧灼，冷却后备用。接种钩、 剪刀、镊子等不使用时浸泡在95‘冗的酒精中,用 时在火焰上灭菌，待冷却后使用。每次使用前均 需进行用具灭菌。
⑤将外植体放入经烧灼灭菌的不锈钢盘或 瓷盘内处理。如外植体为茎段的，将茎段上的叶 柄和茎的上下端剪掉一小节;培养脱毒苗的，在 双筒解剖镜下剥离切取大小0. 2〜0.‘3 mm时莖 尖分生组织。
⑥烧灼瓶口和塞子，将培养瓶倾斜拿稳，打 开塞子，用镊子将接种材料送人瓶内，用接种钩 将材料压人培养基中，烧灼瓶口和塞子,并上塞。 此过程中要注意避免细菌污染。-
4. 4. 3 培养
初代培养
将从苗木体上分离下来的部分进行第一次 培养，称初代培养，也称诱导培养。培养基由于 苗木种类的不同而不同，通常是?^5基本培养基 加人适量的苗木生长调节剂及其他成分。首先 在251下进行暗培养,待长出愈伤组织后转入 光培养。此阶段主要诱导芽体解除休眠，恢复 生长。
增殖培养
也称继代培养。外植体的增殖是组培的关 键阶段,在新梢等形成后为了扩大繁殖系数，需 要继代培养。把材料分株或切段转人增殖培养 基中，增殖培养基一般在分化培养基上加以改 良，以利于增殖率的提高。增殖一个月左右后， 可视情况进行再增殖。为了防止变异或突变，通 常只继代培养10〜12次。根据需要，一部分进 行生根培养，一部分仍继代培养，陆续供用。
继代培养的接种过程与初代培养有两点不
生根培养
.继代培养形成的不定芽和侧芽等一般没有 根，必须转到生根培养基上进行生根培养。培养 基通常为1/2朋5培养基加人适量的苗木生长调 节剂。切取增殖培养瓶中的无根苗，接种到生根 培养基上进行诱根培养，一个月后即可获得健壮 根系。有些易生根的苗木在继代培养中通常会
